2、實(shí)驗(yàn)材料和方法

2.1、材料

使用了一種陰離子表面活性劑和兩種非離子表面活性劑。陰離子表面活性劑是LAS（線性烷基苯磺酸鈉，WAKO Chemical Co.，用于JIS中的洗衣洗滌劑測(cè)試，分析最低95%）。如下通過(guò)HPLC分析獲得碳數(shù)分布；C10：15.9%、C11：33.2%、C12：30.3%和C13：20.54%。

兩種非離子表面活性劑是AE8(Alcohol ethoxylate,EO:8,NIPPON SHOKUBAI Co.)和AE9(Alcohol ethoxylate,EO:9,WAKO Chemical Co.)。AE8是一種市售的用于洗衣洗滌劑的非離子表面活性劑，它含有約73%的C12-AE8和27%的C14-AE8（通過(guò)HPLC測(cè)量）。

2.2、生物降解過(guò)程評(píng)價(jià)稀釋水按日本工業(yè)標(biāo)準(zhǔn)（JIS）K 01029-11配制。使用BOD測(cè)試儀（TAITEC Co.）通過(guò)耗氧量法測(cè)量生物降解性變化。神奈川水再生中心提供的返還污泥在收集后不久就被冷凍保存。曝氣48 h后的上清液用于試驗(yàn)。將該上清液稀釋10倍，用玻璃纖維過(guò)濾器過(guò)濾。12.5 mL/L該液體用于生物降解試驗(yàn)。生物降解率計(jì)算為BOD/ThOD（理論需氧量）。該ThOD值通過(guò)使用總氧分析儀(MODEL 1548 Yuasa Ionics Inc.)測(cè)量總需氧量(TOD)來(lái)確認(rèn)。

2.3、表面張力測(cè)量

將與BOD測(cè)試儀的實(shí)驗(yàn)樣品含有相同種源和測(cè)試試劑的測(cè)試水制備在測(cè)試瓶中。將試瓶塞緊，將試液在20℃的避光培養(yǎng)箱中持續(xù)攪拌。在表面張力測(cè)量之前，以固定間隔取出一定量的樣品溶液。使用Wilhelmy天平方法EZ-Pi(KIBRON Inc.)的帶有鉑絲探針的自動(dòng)表面張力計(jì)用于表面張力測(cè)量。

2.4、HPLC分析

2.4.1、LAS的固相萃取和HPLC分析

從生物降解過(guò)程中取出的液體樣品通過(guò)玻璃纖維過(guò)濾器(1μm,47 mm,GL science)過(guò)濾。然后將提取物通過(guò)C18 Empore盤(pán)(GL Science)過(guò)濾以收集表面活性劑及其降解產(chǎn)物。從圓盤(pán)上除去水后，加入5 mL甲醇（Junsei Chemistry）以洗脫分析樣品，其中包括表面活性劑及其降解產(chǎn)物。該程序的收集率約為80%。

使用紫外檢測(cè)器（UV-8010，Tosoh）和熒光檢測(cè)器（RF-535，Shimadzu）通過(guò)HPLC12分析LAS。ODS柱（Kaseisorb ODS2000 4.6?250 mm，Tokyo Chemical Industry）在柱溫40?C下使用。加入0.1 M NaClO4的甲醇-水(45:55)用于流動(dòng)相13)。流速為1.0 mL/min(ISOCRATIC)。

2.4.2、AE的固相萃取衍生化

對(duì)AE進(jìn)行了相同的固相萃取程序。提取250μL AE-甲醇溶液置于試管中，減壓揮發(fā)甲醇。然后加入250μL二氯甲烷(Junsei Chemistry)和內(nèi)標(biāo)C18醇(Junsei Chemistry)。為了獲得紫外線吸收，AE通過(guò)添加5μL異氰酸苯酯（Wako Pure Chemical Industries,Ltd.）衍生化，并在烘箱中在55±2?C下加熱45分鐘14,15。該程序的收集率為約85%。

熱處理后，在試管中的樣品中加入250μL甲醇，作為分析樣品。通過(guò)與衍生醇的HPLC峰（Junsei Chemistry）進(jìn)行比較，確定了每個(gè)烷基鏈長(zhǎng)度的AE。

2.4.3、AE的HPLC分析條件

使用與LAS分析相同的色譜柱，并使用UV-8010作為檢測(cè)器來(lái)分析AE。柱溫保持在25?C，流動(dòng)相使用甲醇-水（8:2至10:0）。流速為1.5 mL/min（15分鐘溶劑梯度）。

2.5、急性水生毒性試驗(yàn)

大型水蚤用于測(cè)試。為了使用最近24小時(shí)內(nèi)出生的幼蟲(chóng)進(jìn)行毒性試驗(yàn)，在試驗(yàn)前24小時(shí)僅將成年生物轉(zhuǎn)移到繁殖容器中。Daphnia magna的具體飼養(yǎng)方法在我們之前的論文中有所描述3,4)。從生物降解溶液中取出用于毒性試驗(yàn)的試驗(yàn)溶液。每次試驗(yàn)準(zhǔn)備四個(gè)裝有10mL試液的試管，每個(gè)試管中轉(zhuǎn)移5個(gè)試管。準(zhǔn)備兩個(gè)不含表面活性劑的試管用于空白試驗(yàn)。試管保持在16 h/8 h的明暗頻率條件下，20?C。48小時(shí)后對(duì)死亡和固定的個(gè)體進(jìn)行計(jì)數(shù)。死亡率的計(jì)算方法是將死亡和無(wú)法活動(dòng)的人數(shù)除以總?cè)藬?shù)。48 h毒性試驗(yàn)中的生物降解會(huì)對(duì)毒性產(chǎn)生影響，但在本研究中被忽略。

生物降解過(guò)程中對(duì)于表面活性劑AS、AE的表面活性以及水生生物毒性的性能的關(guān)系——摘要、簡(jiǎn)介

生物降解過(guò)程中對(duì)于表面活性劑AS、AE的表面活性以及水生生物毒性的性能的關(guān)系——材料和方法

生物降解過(guò)程中對(duì)于表面活性劑AS、AE的表面活性以及水生生物毒性的性能的關(guān)系——結(jié)果與討論

生物降解過(guò)程中對(duì)于表面活性劑AS、AE的表面活性以及水生生物毒性的性能的關(guān)系——結(jié)論、致謝！