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新型冠狀病毒核酸檢測原理和檢測流程
來源:xujinping 瀏覽 655 次 發(fā)布時間:2022-10-09
檢測新型冠狀病毒特異序列的方法最常見的是熒光定量PCR(聚合酶鏈式反應)。因PCR反應模板僅為DNA,因此在進行PCR反應前,應將新型冠狀病毒核酸(RNA)逆轉錄為DNA。在PCR反應體系中,包含一對特異性引物以及一個Taqman探針,該探針為一段特異性寡核苷酸序列,兩端分別標記了報告熒光基團和淬滅熒光基團。探針完整時,報告基團發(fā)射的熒光信號被淬滅基團吸收;如反應體系存在靶序列,PCR反應時探針與模板結合,DNA聚合酶沿模板利用酶的外切酶活性將探針酶切降解,報告基團與淬滅基團分離,發(fā)出熒光。每擴增一條DNA鏈,就有一個熒光分子產生。熒光定量PCR儀能夠監(jiān)測出熒光到達預先設定閾值的循環(huán)數(Ct值)與病毒核酸濃度有關,病毒核酸濃度越高,Ct值越小。不同生產企業(yè)的產品會依據自身產品的性能確定本產品的陽性判斷值。
對于新型冠狀病毒的核酸檢測,首先根據試劑盒說明書”樣本要求“部分進行樣本采集,常規(guī)的樣本類型包括咽拭子、鼻拭子、痰液、支氣管灌洗液、肺泡灌洗液等。
獲得患者樣本后,需盡快進行檢測,如無法立即檢測需要轉運的樣本,應按照說明書的要求進行低溫封裝,并送到專門的檢測機構進行檢測。檢測機構收到樣本后,對樣本進行核酸提取,核酸提取試劑應使用批準產品說明書中指定的核酸提取試劑盒。
病毒RNA需要首先逆轉錄為cDNA,再進行擴增檢測。PCR擴增和檢測應使用批準產品說明書中指定的熒光定量PCR儀,通過熒光定量PCR所得到的樣本Ct值的大小,可以判斷患者樣本中是否含有新型冠狀病毒。
上述過程中樣本的采集、保存、轉運,樣本核酸的提取和檢測、結果的判讀均須嚴格按照試劑盒說明書要求進行。